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基因編輯工具
· 基因編輯技術(shù)已歷經(jīng)幾代革新，從最初的ZFNs(zinc-finger nucleases)技術(shù)、TALENs (transcription activator-like effector nucleases)技術(shù)到CRISPR-Cas技術(shù)，再到BE(base editing)技術(shù)及PE(prime editing)技術(shù)等，極大地提高了人類(lèi)對(duì)真核細(xì)胞的基因組進(jìn)行精準(zhǔn)改造的能力，也為治愈各類(lèi)疾病提供了可能。
· 由于設(shè)計(jì)和操作方面的便捷性，CRISPR-Cas系統(tǒng)成為當(dāng)前應(yīng)用最為廣泛的基因編輯技術(shù)，此技術(shù)涉及到的核酸酶有Cas9、Cas9n、Cas12a和hfCas12Max?等，其中Cas9在PAM序列的上游3-4bp處切割DNA，Cas12a切割雙鏈DNA后形成4-5個(gè)核苷酸突出的5’粘性末端；hfCas12Max?也以交錯(cuò)方式切割，形成5’粘性末端。
· BE技術(shù)是基于脫氨酶與CRISPR-Cas9系統(tǒng)融合形成的技術(shù)。主要有胞嘧啶堿基編輯器（CBE）、腺嘌呤堿基編輯器（ABE）等，可實(shí)現(xiàn)單個(gè)堿基對(duì)的轉(zhuǎn)換。
愷佧生物隆重推出GMP級(jí)Cas9核酸酶以及高活性的AsCas12a和hfCas12Max?等一系列基因編輯酶！其中，Cas9核酸酶已完成DMF備案（編號(hào)：036578），并已協(xié)助客戶(hù)完成IND申報(bào)。 若您使用愷佧生物Cas9核酸酶用于細(xì)胞與基因治療項(xiàng)目的藥物開(kāi)發(fā)，在進(jìn)行新藥注冊(cè)的監(jiān)管備案文件中可直接引用我們的DMF 編號(hào)，從而加快藥品審查。此外，我們還可提供科研級(jí)&GMP級(jí)CBE——BS-EP1(商品名：AccuBase?)，將C·G堿基對(duì)替換為T(mén)·A堿基對(duì)，實(shí)現(xiàn)基因的修正、激活、沉默等以達(dá)到治療疾病的目的。
Cas9 Nuclease(GMP grade)
產(chǎn)品特點(diǎn)
質(zhì)量要求
產(chǎn)品應(yīng)用
在細(xì)胞與基因治療領(lǐng)域，用于造血干細(xì)胞和免疫細(xì)胞的基因修飾
產(chǎn)品數(shù)據(jù)
01 純度
SEC-HPLC
Fig. 1 SEC-HPLC檢測(cè)Kactus Cas9核酸酶的純度高于95%
RP-HPLC
Fig. 2 RP-HPLC檢測(cè)Kactus Cas9核酸酶的純度高于95%
02 活性
體外切割活性檢測(cè)

Fig. 3 Cas9核酸酶體外切割DNA性實(shí)驗(yàn)，三批次的Cas9核酸酶的體外切割效率基本相當(dāng)。

細(xì)胞水平活性檢測(cè)

Fig. 4 Cas9核酸酶用于293T細(xì)胞、Jurkat細(xì)胞、T細(xì)胞的基因敲除，其在不同細(xì)胞中的基因敲除效率與競(jìng)品相當(dāng)。

Cas9 (CRISPR Associated Protein 9) ELISA Kit
在ex vivo基因治療中,細(xì)胞經(jīng)CRISPR-Cas9系統(tǒng)改造后，在回輸人體之前需對(duì)胞外或胞內(nèi)Cas9核酸酶的殘留進(jìn)行檢測(cè)。 愷佧生物精心開(kāi)發(fā)了高靈敏的殘留檢測(cè)試劑盒Cas9 (CRISPR Associated Protein 9) ELISA Kit，其靈敏度可達(dá)0.125 ng/ml。

Fig. 5 Cas9 (CRISPR Associated Protein 9) ELISA Kit檢測(cè)原理

Fig. 6 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制示例

01 準(zhǔn)確度
稀釋緩沖液中加樣回收率檢測(cè)

Fig. 7 在稀釋緩沖液中檢測(cè)三個(gè)不同濃度的Cas9核酸酶分析樣本的回收率，結(jié)果顯示回收率介于80%-120%，表明試劑盒在稀釋緩沖液中檢測(cè)Cas9核酸酶的準(zhǔn)確度高。

02 精密度
使用同一批次檢測(cè)高中低三種不同濃度的Cas9核酸酶樣本，每個(gè)樣本重復(fù)測(cè)試10次，結(jié)果顯示每批次試劑盒檢測(cè)不同濃度樣本的CV都小于10%，表明試劑盒具有良好的批內(nèi)重復(fù)性。
使用三批次劑盒檢檢測(cè)高中低三種不同濃度的Cas9核酸酶樣本，共檢測(cè)30次，結(jié)果顯示每種樣本三個(gè)批次間的CV值都小于15%，表明試劑盒具有良好的批間重現(xiàn)性。
AsCas12a Nuclease
產(chǎn)品數(shù)據(jù)
SEC-HPLC
Fig. 8 SEC-HPLC檢測(cè)AsCas12a 核酸酶的純度高于95%
體外切割活性
Fig. 9 經(jīng)體外切割實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，AsCas12a 核酸酶可以靶向切割95%以上的底物。
hfCas12Max?

hfCas12Max?是輝大基因（HuidaGene）開(kāi)發(fā)的新型的DNA基因編輯工具酶，愷佧生物獲得hfCas12Max?在大中華區(qū)研究級(jí)蛋白的生產(chǎn)銷(xiāo)售排他許可，以及GMP級(jí)產(chǎn)品的生產(chǎn)銷(xiāo)售普通許可。hfCas12Max?是對(duì)xCas12i DNA編輯工具進(jìn)行蛋白工程化改造、篩選及驗(yàn)證，開(kāi)發(fā)出的高保真變體，相較傳統(tǒng)的Cas9和Cas12，hfCas12Max?具有更寬泛的PAM識(shí)別和更高效的編輯效率，且相當(dāng)或更低的脫靶效應(yīng)。

產(chǎn)品數(shù)據(jù)
TIDE分析基因敲除效率
Fig.10 hfCas12Max? RNP電轉(zhuǎn)CD3+ T細(xì)胞后，TIDE分析B2M和TRAC基因敲除效率均超過(guò)90%。
流式細(xì)胞術(shù)分析基因敲除效率
Fig. 11 經(jīng)流式檢測(cè)，由hfCas12Max? 介導(dǎo)的基因編輯系統(tǒng)可以高效地同時(shí)敲除CD3+ T細(xì)胞中的B2M和TRAC基因，雙基因敲除效率超過(guò)90%。
BS-EP1(商品名：AccuBase?)——新型CBE
BS-EP1(商品名：AccuBase?)是通過(guò)基因工程手段設(shè)計(jì)的CBE，由 Cas9 Nickase、脫氨酶、UGI 融合而成，可以在 3-12 窗口范圍內(nèi)進(jìn)行有效編輯(遠(yuǎn)離 PAM 的為第1位)，將窗口范圍內(nèi)的 C 脫氨形成 U，U利用細(xì)胞內(nèi)修復(fù)機(jī)制轉(zhuǎn)變?yōu)?T，從而實(shí)現(xiàn)C→T的轉(zhuǎn)變，并且在編輯的過(guò)程中不會(huì)引入 DNA 雙鏈斷裂（Double-Strand Break，DSB），確保了編輯的安全性。
AccuBase? 的結(jié)構(gòu)經(jīng)過(guò)巧妙的設(shè)計(jì)，創(chuàng)造性地將脫氨酶可逆的包裹起來(lái)，只有當(dāng) sgRNA 與靶位點(diǎn)結(jié)合時(shí)才能發(fā)揮脫氨作用，大幅度降低了與非靶 DNA 的隨機(jī)結(jié)合，可以實(shí)現(xiàn)接近零脫靶的效果，同時(shí)維持了高效的編輯活性。愷佧生物基于Structure Aided Design and Multiplex Screening SAMSTM平臺(tái)，通過(guò)對(duì)AccuBase?蛋白的表達(dá)工藝、純化工藝、制劑配方開(kāi)發(fā)等一系列步驟的篩選和優(yōu)化，最終制備出高穩(wěn)定性、高純度和高活性的CBE堿基編輯器。

Fig. 12 AccuBase?工作示意圖（左:未編輯狀態(tài) 右:編輯狀態(tài)）

產(chǎn)品數(shù)據(jù)
SEC-HPLC
Fig. 13 SEC-HPLC檢測(cè) AccuBase?純度高于80%
TIDE分析編輯效率
Fig. 14 使用AccuBase?分別敲除原代T細(xì)胞的PDCD1, TRAC和B2M基因，經(jīng)TIDE分析，AccuBase?對(duì)三個(gè)基因的敲除效率均超過(guò)80%。
流式細(xì)胞術(shù)分析編輯效率

Fig. 15 使用AccuBase?分別敲除原代T細(xì)胞膜上的PDCD1, TRAC和B2M基因，經(jīng)流式分析，在蛋白水平上，AccuBase?對(duì)PD1和B2M的敲除效率超過(guò)80%，對(duì)TRAC的敲除效率達(dá)到96%。

產(chǎn)品列表
貨號(hào) 產(chǎn)品名稱(chēng) 規(guī)格
KACTUS-CAS9 Cas9 Nuclease 1 mg/3 mg 立即詢(xún)價(jià)
KACTUS-CAS9-GMP Cas9 Nuclease (GMP grade) 3 mg 立即詢(xún)價(jià)
CAS-MM00B Cas9 (CRISPR Associated Protein 9) ELISA Kit 96 T 立即詢(xún)價(jià)
CAS-EE111 SpCas9 D10A Nickase 1 mg 立即詢(xún)價(jià)
CAS-EE121 AsCas12a Nuclease 1 mg 立即詢(xún)價(jià)
CAS-EE128 hfCas12Max? 500 μg/1 mg 立即詢(xún)價(jià)
KD-0001 BS-EP1（Trade name: AccuBase?） 200 μg/500 μg/1 mg 立即詢(xún)價(jià)
GMP-KD-0001 BS-EP1（Trade name: AccuBase?), GMP grade 1 mg 立即詢(xún)價(jià)
ACB-EE00B AccuBase? ELISA Kit 96 T 立即詢(xún)價(jià)